Introducción
Desde el momento del anuncio del primer analizador de aminoácidos por DH Spackman, WH Stein y S.Moore en 1958 1), estos instrumentos se han utilizado ampliamente para analizar el contenido de aminoácidos de proteínas y péptidos y para estudiar los aminoácidos y sustancias relacionadas presentes en productos farmacéuticos, soluciones biológicas y otras muestras. Cuando se introdujo el instrumento original, el uso de la cromatografía de intercambio iónico y las reacciones de ninhidrina, tecnologías de vanguardia en ese momento, hicieron posible el análisis de aminoácidos con alta selectividad, alta velocidad y alta precisión. Además, el uso exitoso de técnicas de automatización en el campo de la cromatografía líquida allanó el camino para nuevos desarrollos revolucionarios, estableciendo la introducción del análisis de aminoácidos como un hito clave en la historia de la investigación. Más recientemente, el desarrollo de un gran número de productos farmacéuticos basados en péptidos ha impulsado una apreciación renovada del valor de esta técnica analítica, que es muy adecuada para satisfacer las necesidades analíticas de campos de investigación que durante mucho tiempo han dado prioridad a la alta confiabilidad de los datos.
Características clave del LA8080
El analizador de aminoácidos de alta velocidad LA8080 es un instrumento dedicado para la cromatografía de intercambio iónico mediante el método de derivatización posterior a la columna utilizando reactivos de ninhidrina; sus características clave sonlos siguientes 3 atributos (Figura 2).
MICROSCOPIOS DE ALTA RESOLUCION
Análisis ilustrativos
Como método estándar de análisis, la Figura 1 muestra un cromatograma de hidrolizado de proteína. Un eluyente de citrato de sodio se transmite a una velocidad de flujo de 0,40 ml / min, mientras que una columna de resina de intercambio catiónico # 2622 (id 4,6 mm ×60 mm) con partículas de 3 µm se mantiene a una temperatura de 57 ° C. El reactivo de ninhidrina se administra a un caudal de0,35 ml / min; después de producir color a una temperatura de reacción de 135 ° C, la absorción en la longitud de onda visible de 570 nmse detecta. Se inyectan 20 µl de una mezcla estándar de aminoácidos. Después de 30 minutos de análisis, se observó una resolución de 1,2 o mayor en todos los casos. Para el ácido aspártico (Asp), el límite de detección es de 2,5 pmol o menos (relación señal-ruido de 2) con una excelente repetibilidad del área de pico (2 nmol) dentro del 1,0% RSD
Fig.1 Análisis de muestra de hidrolizado de proteínas
Para analizar la composición de aminoácidos de las proteínas, normalmente se realiza un tratamiento de hidrólisis con ácido clorhídrico; sin embargo, la cisteína, la cistina y la metionina se oxidan fácilmente. Por esta razón, un método alternativo de análisis ampliamente utilizado es realizar un tratamiento de hidrólisis con ácido clorhídrico después de oxidar con ácido perfórmico, luego analizar el ácido cisteico resultante (CySO 3 H) y la metionina sulfona (MetSON). También presentamos los resultados de un estudio en el que se analizaron CySO 3 H y MetSON solo durante cortos períodos de tiempo (Figura 2).
➢ El LA8080 es cómodo .
El diseño ergonómico del instrumento tiene en cuenta cuidadosamente las líneas de trabajo del operador y los movimientos de procedimiento. El uso de una nueva técnica para los reactivos de ninhidrina, en la que se mezclan dos líquidos inmediatamente antes de la reacción de derivatización, elimina la necesidad de refrigeración. Pueden usarse productos estándar disponibles comercialmente para el líquido tampón (eluyente) y el reactivo de reacción.
➢ El LA8080 es compacto .
AminoSAAYA es el primer instrumento de su tipo en adoptar una configuración de escritorio, un rediseño innovador de modelos independientes
anteriores. Además, el nuevo diseño ocupa un 30% menos de superficie que sus predecesores. El instrumento presenta conveniencia para almacenar botellas de solución y un soporte para viales, y su diseño de acceso frontal facilita operaciones como el intercambio de columnas y sellos.
➢ El LA8080 es confiable .
AminoSAAYA es compatible con los modelos L-8800 y L8900, para admitir muchos datos fiables de métodos analíticos cromatográficos de intercambio iónico. Las reacciones de ninhidrina de alta estabilidad garantizan una alta precisión en los análisis de hidrolizados de proteínas y fluidos fisiológicos.
Fig.4 Hidrolizado de proteína oxidada con ácido perfórmico y un ejemplo de un análisis a corto plazo
Conclusiones
La continua disponibilidad del método introducido por Moore et al.. puede atribuirse a al menos dos factores: uno asociado con el sistema de separación y otro con el sistema detector de reacción. La combinación entre las resinas de intercambio iónico de polímero de poliestireno y los
aminoácidos multiconstituyentes es excelente, mientras quepara los aminoácidos neutros de especies aromáticas como la fenilalanina y la tirosina existe una interacción hidrófoba con el material del polímero base que también contribuye a lograr una buena separación. Por otro lado, el método de derivatización posterior a la columna que utiliza ninhidrina tiene las características clave de una alta selectividad con respecto a los contaminantes en las muestras; Siempre que se realice correctamente la desproteinización y el filtrado, se pueden esperar resultados analíticos muy fiables.
* Aplicación tomada de: https://www.hitachihightech.com/global/sinews/technical_explanation/11
0303/