Cultivo de células adherentes
Varios tipos de células dependen del anclaje y, por lo tanto, funcionan de manera óptima cuando se adhieren a un sustrato. Por esta razón, se han desarrollado varios sustratos / micro portadores, generalmente con forma de esferas con un diámetro en el rango de 100-200 micrones. Los materiales de elección incluyen vidrio, colágeno o dextrano recubierto de colágeno. Las líneas celulares más adecuadas incluyen fibroblastos diploides humanos, células primarias de embrión de pollo y células de riñón bovino Madin-Darby (MDBK).
Se hace que las células crezcan en estos micro vehículos dentro de un medio de crecimiento hasta que cubren el micro vehículo y no proliferan más y se ha logrado la biomasa máxima.
Unidad de tripsinización
El problema principal en la recolección es separar las células adheridas a sus micro portadores inyectando en el medio de crecimiento una cantidad cuidadosamente medida de tripsina, suficiente para disociar las proteínas involucradas en la adhesión, pero no lo suficiente para disociar las células en sí.
Filtros tipo Spin
Los filtros de centrifugación se utilizan para el bio procesamiento contínuo utilizando células dependientes del anclaje. El filtro giratorio con un tamaño de poro de 75 micrómetros mantendrá las células y los micro portadores en el biorreactor, mientras que el medio gastado se puede eliminar utilizando una tubería de perfusión.
Filtro estático
Para el muestreo de un cultivo celular dependiente del anclaje, hemos desarrollado tubos de muestreo con filtro estático. El filtro estático al final de la tubería de muestra separa los micro portadores del medio de cultivo, lo que permite extraer una muestra libre de micro portadores del cultivo.
Unidad de tripsinización
Applikon ha desarrollado una unidad de tripsinización que está diseñada para minimizar el tiempo de contacto entre la tripsina y las células mientras maximiza el efecto de la tripsina en el desprendimiento de las células de los micro portadores.
La unidad reúne micro portadores cubiertos de células en una cámara con un filtro en la parte inferior del recipiente y el eje del vibromixer colocado encima. Después de inyectar tripsina en el medio, el vibromixer mezcla el medio y los microportadores cubiertos de células. El propósito del vibromixer es ayudar mecánicamente a que las células se desprendan, así como empujarlas a través del filtro inferior y hacia la sección de filtrado (debajo del filtro) del recipiente. Se cierra un tubo de recolección después del filtro en el fondo del recipiente (lado del filtrado) hasta que se completa la tripsinización. Una vez completado, se abre el tubo de recolección y las células se drenan en un matraz recolector, listo para pasar.
Filtros tipo Spin
Se pueden usar filtros giratorios para lograr una perfusión continua durante un cultivo de células de mamífero; en este caso, se agrega medio con nutrientes al cultivo mientras se retira el medio gastado. La principal ventaja de la aplicación de filtros giratorios es la mayor concentración de biomasa; una concentración de biomasa típica que se puede obtener utilizando un filtro giratorio es de 2 a 5 x 106 células por ml.
El filtro giratorio está montado en el eje del agitador, justo encima del impulsor marino vortex. La rotación del filtro y el patrón de flujo axial, causado por el impulsor marino vortex, evitan que el filtro se ensucie.
El filtro de centrifugado está disponible en dos tamaños de poro:
- El filtro de 10 µm retendrá el 100% de las células de mamíferos y dará como resultado la mayor concentración de biomasa que se pueda obtener; Los filtros con este tamaño de poro se aplican principalmente en cultivos de células en suspensión.
- El filtro de 75 µm retendrá parte de las células en un cultivo de células suspendidas (dependiendo de la velocidad de agitación y otras condiciones del proceso); por lo tanto, la concentración celular final no será tan alta como en el caso anterior, pero la vida útil de este filtro es mucho más larga debido a que tiene menos suciedad. También se recomienda el uso de este tamaño de poro más grande para cultivos de micro portadores, ya que las células vivas se unirán a la superficie del micro portador y, por lo tanto, se retendrán automáticamente.
- El medio gastado se bombea fuera del filtro giratorio a través de un tubo de perfusión de altura ajustable. El diámetro interno de esta tubería es de 2 mm; debido a esto, el tiempo de permanencia del medio en la tubería es muy corto.
Filtro estático
El tubo de muestreo de pequeño diámetro interno para pantallas tiene un volumen interno muy pequeño. El tubo de muestreo de altura ajustable se puede utilizar con o sin pantalla de muestreo. Si se utiliza sin pantalla de muestras, el pequeño volumen muerto de la tubería garantiza muestras del cultivo representativas del contenido del reactor. Si se utiliza una pantalla de muestra al final de esta tubería, se pueden extraer muestras libres de células del cultivo. Las pantallas de muestra están disponibles en tamaños de poro de 13 μm, 25 μm, 76 μm y 105 μm.
Referencias
Aplicación tomada de https://www.applikon-biotechnology.com/en/solutions/adherent-cell-cultivation/