La huella dactilar de fluorescencia para la distinción de alimentos es una técnica para el análisis multivariado de datos numéricos que implica la adquisición de un patrón de fluorescencia exclusivo de una muestra (huella dactilar de fluorescencia) y el análisis de la intensidad de la fluorescencia en la enorme cantidad de datos adquiridos. Las aplicaciones previstas incluyen la identificación de muestras y la determinación de su origen geográfico 1) , el cálculo de proporciones de muestras mezcladas 2) , la detección de micotoxinas y otras sustancias peligrosas 3- 6)y cuantificación de componentes funcionales.
En la toma de huellas digitales de fluorescencia, el modo de medición del espectro de fluorescencia 3D de un espectrofotómetro de fluorescencia se usa para trazar mapas de contorno o vistas aéreas de tres fenómenos: longitud de onda de excitación, longitud de onda de fluorescencia e intensidad de fluorescencia. Debido a que la fluorescencia se observa más hacia el lado de longitud de onda larga del espectro que la longitud de onda de excitación, y debido a que la longitud de onda de fluorescencia para el mismo componente no cambia incluso si se cambia la longitud de onda de excitación, la distribución de la intensidad de fluorescencia representada en los mapas de contorno adquiere la apariencia de una huella dactilar. En el pasado, la identificación o cuantificación de componentes utilizaba longitudes de onda de pico único que comprendían la longitud de onda de excitación y la longitud de onda de fluorescencia del componente de interés, el cultivo de células de insectos sf9.
Espectrofotómetro de fluorescencia F-7000 y accesorio de
filtro automático
El espectrofotómetro de fluorescencia F-7000 incorpora tecnología para la medición del espectro de fluorescencia tridimensional de alto rendimiento, como la mejor velocidad de escaneo de su clase (60.000 nm / min), configuración automática de procesamiento interactivo para escaneo de alta velocidad y excitación rápida conmutación de longitud de onda.
La eliminación simple y rápida de la luz de orden superior que aparece como picos fantasma fue un desafío en la medición del espectro de fluorescencia tridimensional. El accesorio de filtro automático que se muestra en la Fig.1 elimina el efecto de luz no deseada de orden superior (p. Ej., Luz de segundo orden, luz de tercer orden) exclusivo del espectrómetro al insertar automáticamente un filtro adecuado a las condiciones de medición (Fig.2) .
Fig.1 Aspecto externo del espectrofotómetro de fluorescencia F-7000 y accesorio de filtro automático
Las tres características distintivas del análisis de huellas dactilares de fluorescencia
➢ Capacidad para identificar análisis con un volumen de datos masivo
➢ Facilidad y sencillez de análisis
➢ Disminución del costo de análisis
Análisis de discriminación del aceite de oliva
Se midieron las huellas de fluorescencia de aceite de oliva comercial y aceite de oliva virgen. La figura 3 muestra los resultados de la medición. Las muestras se colocaron en una celda de PMMA sin dilución u otro pretratamiento y se midió la fluorescencia de la superficie de la muestra.
Todas las muestras de aceite de oliva demostraron picos de fluorescencia en dos regiones: longitudes de onda de excitación de 250-450 nm y longitudes de onda de fluorescencia de aproximadamente 300-600 nm (Región 1), y longitudes de onda de excitación de 300-700 nm y longitudes
de onda de fluorescencia de 650-750 nm (Región 2). La Región 1 sugirió la fluorescencia correspondiente a los productos de oxidación, y la Región 2 sugirió la fluorescencia correspondiente a la clorofila 7). La intensidad de fluorescencia se recogió del pico de fluorescencia de la Región 1 a una longitud de onda de excitación de 320 nm y una longitud de onda de fluorescencia de 400 nm (i) y del pico de fluorescencia de la Región 2 a una longitud de onda de excitación de 415 nm y una longitud de onda de fluorescencia de 675 nm (ii), y Se calculó la relación de intensidad de fluorescencia ((ii) / (i)) de estos picos. La comparación de las proporciones de intensidad de fluorescencia mostró que los valores eran más altos para el aceite de oliva virgen que para el aceite de oliva comercial. El aceite de oliva virgen es un aceite exprimido de las aceitunas y no sometido a refinado u otro procesamiento, por lo que se detectaron altos niveles de clorofila contenida en las aceitunas. El aceite de oliva comercial, sin embargo, se somete a refinamiento u otro procesamiento, lo que aparentemente redujo su contenido de clorofila en el proceso, lo que llevó a la detección de niveles bajos. El aceite de oliva virgen también mostró bajos niveles de fluorescencia correspondientes a los productos de oxidación. En realidad, debido a que se han establecido estándares de calidad para el nivel de oxidación, sabor, fragancia y otros atributos del aceite de oliva virgen, este método no se puede utilizar para determinar la calidad del aceite de oliva; sin embargo, es probable que encuentre aplicación para una fácil discriminación de artículos como productos falsificados
Fig.3 Espectro de fluorescencia tridimensional del aceite de oliva
Observaciones finales
El campo de los alimentos involucra muchos tipos diferentes de especímenes, y las perspectivas destacadas por el análisis también difieren sustancialmente, dependiendo de su propósito. Como resultado, la investigación ha abordado la expansión de ejemplos aplicados con fines tales como la creación de técnicas analíticas adecuadas para diferentes especímenes y propósitos 5) . Los esfuerzos para aplicar el análisis de huellas dactilares de fluorescencia a los campos de alimentos han dado como resultado resultados reportados en una amplia gama de campos, y los niveles de interés han aumentado dramáticamente en los últimos tiempos. Se espera que el análisis de huellas dactilares de fluorescencia se asiente como un método para un análisis más conveniente y rápido que los métodos convencionales y que eventualmente se convierta en una tecnología con potencial de contribución social.
Aplicación tomada : https://www.hitachihightech.com/global/sinews/technical_explanation/06 60/